Relationship among damaged chromatin, motility and viability in cryopreserved spermatozoa from Brahman bulls / Relación entre la alteración de la cromatina, movilidad y viabilidad en espermatozoides criopreservados de toros Brahman / Relação entre a alteração da cromatina, motilidade e viabilidade dos espermaotozoides criopreservados de touros Brahman

The aim of this study was to determine the percentage of sperm with damaged chromatic measure with toluidine blue stain and it´s relationship with motility and viability in criopreserverd semen from Brahman bulls. Three ejaculates from six Brahman bulls were used. Immediately after thawing, sperms were stained with toluidine blue to establish chromatin integrity (sperms with normal chromatin were light blue or green while sperms with damaged chromatin were dark blue or violet). Sperms were also stained with eosin-nigrosin to determine viability (live sperms were unstained while dead sperms were pink). Motility was measured under light microscope. Effects of bull, ejaculate, and the interaction between variables were assessed. The percentage of live sperms was 50.02 ( ± 14.13%). The mean motility was 33.88 (± 12.43%), while the percentage of sperms with damaged chromatin was 4.17 ( ± 2.96%). Viability was positively correlated with motility (r=0.77217, p=0.0002), and negatively correlated with damaged chromatin sperms (r= -0.43104, p=0.0087). Motility percentage was negatively correlated with the percentage of sperms with damaged chromatin (r=-0.48337, p=0.0421). In conclusion, cryopreserved semen of Brahman bulls presented a low level of chromatin damage, and this trait was negatively correlated with sperm motility and viability.

El objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada medida con la tinción de azul de toluidina, y su relación con la motilidad y la vitalidad del semen criopreservado de toros Brahma. Para ello, se utilizó semen de tres eyaculados de seis toros Brahman, el cual una vez descongelado se procedió a teñir con azul de toluidina para determinar la integridad de la cromatina (espermatozoides con cromatina normal teñidos de azul o verde claro; espermatozoides con cromatina anormal teñidos de azul oscuro o violeta), también se tiñeron con eosinanigrosina para determinar la viabilidad (espermatozoides vivos permanecen blancos; espermatozoides muertos se tiñen de rosado) y se estimó la motilidad espermática mediante microscopía óptica. Se evidenciaron las diferencias en todos los parámetros evaluados debidas al efecto toro y al eyaculado, así como a la interacción entre estas dos variables. El porcentaje de espermatozoides vivos fue de 50.02 ± 14.13% y la motilidad espermática promedió un 33.88 ± 12.43%, mientras que el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada fue de 4.17 ± 2.96%. El porcentaje de espermatozoides vivos se correlacionó positivamente con la motilidad (r=0.77217, p=0.0002), y negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina dañada (r= -0.43104, p=0.0087), mientras que el porcentaje de motilidad se correlacionó negativamente con el porcentaje de espermatozoides con cromatina anormal (r= -0.48337, p=0.0421). En conclusión, el semen criopreservado de toros Brahman presenta un bajo nivel de espermatozoides con daño en la cromatina, lo cual se correlaciona negativamente con la motilidad y la vitalidad espermática.

O objectivo deste estudo foi determinar a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada, determinada pela coloração com azul de toluidina e sua relação com a viabilidade e a mobilidade do esperma cripreservado de touros Brahman. Para isso, foram utilizados três ejaculados de sêmen de seis touros Brahman, que uma vez descongelado foram coradas com azul de toluidina para determinar a integridade da cromatina (espermatozóides com cromatina normal coloream de azul ou verde; cromatina de espermatozóides con cromatina danificada, coloream de azul escuro ou violeta). Também foram corados com eosina nigrosina para determinar a viabilidade (espermatozóides vivos permanecem brancos e os mortos de cor rosa) e a motilidade espermática foi estimada por microscopia de luz. Foram encontradas diferenças significativas em todos os parâmetros, devido ao efeito de touro e o ejaculado, bem como a interacção entre essas duas variáveis. A percentagem de espermatozóides vivos foi de 50.02 ± 14.13% e motilidade espermática média de 33.88 ± 12.43%, enquanto a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada foi de 4.17 ± 2.96%. A percentagem de espermatozóides vivos foi positivamente correlacionada com a motilidade (r=0.77217, p=0.0002) e negativamente com a porcentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.43104, p= 0.0087), enquanto que a percentagem de motilidade correlacionou negativamente com a percentagem de espermatozóides com cromatina danificada (r = -0.48337, p=0.0421). Em conclusão, o sêmen de touros Brahman criopreservados tem um baixo nível de dano da cromatina, que está correlacionada negativamente com a motilidade e a vitalidade do esperma.

Efecto de la dosis de eCG sobre la inducción del celo en cabras mestizas luego de un tratamiento corto con Medroxiprogesterona / Effect of eCG Dosage on Estrus Induction in Crossbred Goats After a Short-Term Medroxiprogesterone Treatment

El propósito del presente estudio fue evaluar el efecto de la dosis de gonadotropina coriónica equina (eCG) sobre la inducción del celo en cabras mestizas manejadas bajo condiciones tropicales. Las cabras (n = 32) fueron tratadas con una esponja intravaginal impregnada con 50 mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) durante seis días. Al momento del retiro de las esponjas, las cabras fueron divididas al azar en tres grupos: control (GC, n=11), no recibieron eCG; G250: (n=10) recibieron 250 UI de eCG vía intramuscular y G500: (n=11) recibieron 500 UI de eCG vía intramuscular. La eCG no afectó la tasa de expresión de celo, siendo 81,8% (9/11) para el GC y de 100% para los grupos G250 y G500 (P>0,05). El intervalo al celo fue significativamente más corto en el grupo G500 (32,54 ± 3,00 horas, P<0,05) que en los grupos G250 y GC (40,65 ± 3,27 y 42,20 ± 3,54 horas, respectivamente). La duración del celo no difirió entre los grupos (P>0,05). El porcentaje de cabras repitiendo celo, luego de un ciclo estrual de corta duración, varió según el grupo, siendo de 27,3% (3/11) en el grupo G500 y de 10% (1/10) en el grupo G250; mientras que ninguna cabra del grupo control repitió celo luego de un ciclo estrual corto; no se observaron diferencias significativas entre los grupos (P>0,05). En conclusión, la eCG no es necesaria para inducir el celo en cabras tratadas por seis días con una esponja intravaginal conteniendo MAP, sin embargo, la dosis de 500 UI de eCG fue necesaria para acortar el intervalo al celo.

The aim of this study was to evaluate the effect of dosage of equine chorionic gonadotrophin (eCG) dose on the estrus induction after a short-term medroxyprogesterone treatment in crossbred goat under tropical conditions. Goats (n = 32) received an intravaginal sponge containing 50 mg of medroxyprogesterone acetate (MAP) for six days, at time of sponge withdrawal goats were divided randomly in three groups: CG, control group (n=11), did not received eCG; the second group (G250, n=10), received 250 IU of eCG intramuscular and the third group (G500, n =11), received 500 IU of eCG IM. Treatment with eCG did not affect the rate of estrus presentation, being 81.8% (9/11) for GC group and 100% for groups G250 (10/10) and G500 (11/11), P>0.05. The interval to estrus was significantly shorter in group G500 (32.54 ± 3.00 hours, P<0.05) than GC and G250 (40.65 ± 3.27 y 42.20 ± 3.54 hours, respectively). Estrus duration was not affected by eCG treatment (P>0.05). A shorter interestrus interval was observed in 27.3% (3/11) of goats in G500 and 10% (1/10) of goats in G250, while no goats in GC had a shorter interestrus interval. In conclusion, eCG is not necessary to induce estrus in goats treated for six days with an intragavinal sponges containing MAP, however the dose of 500 IU was necessary to shortens the interval to the estrus.

Brief communication: effect of post-mating progestagen administration on pregnancy rate in crossbred goats following an induced estrus

Los celos inducidos con progesterona o progestagenos son de menor fertilidad en comparación con los celos naturales. Sin embargo, la administración postmonta de progesterona ha sido reportada por incrementar el desarrollo embrionario y la tasa de preñez; por lo tanto, el propósito de este estudio fue evaluar el efecto de la administración postmonta de un progestageno sobre la tasa de preñez en cabras mestizas tropicales luego de un celo inducido con acetato de medroxiprogestrona (MAP) durante el periodo temprano postparto. La inducción del celo se inicio el día 31,3 ± 1,7 postparto mediante la utilización de esponjas intravaginales impregnadas con 60 mg de MAP durante 14 días y al momento del retiro de las esponjas se aplicaron 500 UI de eCG, vía intramuscular. El celo fue detectado cada seis horas a partir de 24 horas de retiradas las esponjas. El servicio se realizó por monta natural con dos machos enteros. Cinco días luego de la monta, las cabras servidas fueron distribuidas de forma aleatoria en dos grupos, el grupo control (n=18), sin tratamiento; y el grupo MAP (n=18), que recibió una esponja con 60 mg de MAP por 14 días. El diagnóstico ultrasonográfico de preñez se realizó a los 50 días postmonta. El tratamiento con MAP no afectó la tasa de preñez, con 44,4 por ciento (8/18) en el grupo MAP, mientras que en el grupo control fue de 55,5 por ciento (10/18), P>0,05. En conclusión, el tratamiento con una esponja impregnadas con 60 mg de MAP entre los días 5 y 19 postmonta no afectó la tasa de preñez luego de un celo inducido durante el período postparto temprano en cabras mestizas tropicales.

Estrus induced with progesterone or progestagens have low fertility compared to natural estrus. However, post-mating progesterone administration has been reported by increases embryo development and pregnancy rate; therefore the aim of this study was to evaluate the effect of post-mating progestagen administration on pregnancy rate after medroxyprogesterone acetate (MAP) induced estrus in crossbred goats. Estrus induction was started at 31.3 ± 1.7 days post-partum with intra- vaginal sponges impregnated with 60 mg of MAP during 14 days and at time of sponge removal were applied 500 IU of eCG intramuscular. Estrus was detected every 6 hours from 24 hours onwards after sponge withdrawal. Goats were naturally mated with two entry bucks. Five days post-mating, mated goats were randomly assorted into two groups, control group (n=18), without any treatment, and MAP group (n=18), receiving a sponge with 60 mg of MAP for fourteen days. Ultrasonographyc diagnosis of pregnancy was performed at day 50 post-mating. MAP treatment, did not affect the pregnancy rate, with 44.4% (8/18) in MAP group, while in control group was 55.5% (10/18), P>0.05. In conclusion, MAP treatment with a sponge impregnated with 60 mg of MAP between days 5 and 19 post-mating did not affect the pregnancy rate after progestagen induced estrus during the early post-partum period in crossbred tropical goats.

Effect of db-camp on embryonic development of bovine oocytes fertilized with sex sorted semen. / Efecto del db-cAMP Sobre el Desarrollo Embrionario de Ovocitos Bovinos Fecundados con Semen Sexado.

The objective of this study was to improve sexed bovine embryo production with sorted sperm in chemically defined conditions by supplementing the IVF medium with db-cAMP. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured for 18 h in supplemented TCM-199 and fertilized with X- or Y-bearing sperm in the presence of heparin (10 µg/ml), db-cAMP (1 µM) or no treatment (control). Presumptive zygotes were cultured 54 h in g-SOF. From 72 to 144 h post- insemination (hpi) embryos were cultured in c-SOF+NEA and from 144 to 192 hpi embryos were placed in maturation medium without hormones. No significant differences were found among treatments for Y-sperm when compared to controls. A significant (P<0.01) improvement in the proportion of cleaved oocytes was found for X-sperm treated with db-cAMP (70.83%) compared to the Y-sperm inseminated oocytes treated wit db-cAMP (46.37%). Treatment with db-cAMP enabled a better (P<0.05) blastocyst formation rate (19.29%) compared to control (8.47%) and heparin (10.44%). Treatment of db-cAMP significantly increased the rate of blastocysts in X-sperm inseminated oocytes (30.77%) compared to Y-sperm inseminated oocytes treated the same (9.68%) and compared to X- and Y-sperm treated with heparin (5.88% and 15.15%, respectively) and not treated (9.68% and 7.14%, respectively, P<0.05). These results suggest that db-cAMP may prove to be an effective treatment of sorted sperm for in vitro production of female bovine embryos under chemically defined conditions.

El objetivo de este estudio fue mejorar la producción de embriones bovinos con semen sexado bajo condiciones químicamente definidas mediante la suplementación del medio de fecundación con db-cAMP. Los complejos ovocitos cumulus (COCs) fueron madurados por 18 horas en TCM-199 suplementado y fueron fecundados con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (10 g/ml), db-cAMP (1 µM) o sin tratamiento alguno (control). Los presuntivos cigotos fueron cultivados por 54 horas en g-SOF. Desde las 72 a las 144 horas post-inseminación (hpi) los embriones se cultivaron en c-SOF+NEA y desde 144 a 192 hpi fueron colocados en medio de maduración pero sin hormonas. No se observaron diferencias entre tratamientos para los oocitos fecundados con espermatozoides Y cuando se compararon a los controles. Se observó una mejora significativa (P<0,01) en la proporción de ovocitos que se dividieron cuando fueron fecundados con espermatozoides X tratados con db-cAMP (70,83%) en comparación con los fecundados con espermatozoides Y tratados con db-cAMP (46,37%). El tratamiento con db-cAMP fue capaz de inducir una mayor (P<0,05) tasa de formación de blastocistos (19.29%) en comparación a los tratamientos control (8,47%) y heparina (10,44%). El tratamiento con db-cAMP incrementó (P<0,05) la tasa de embriones de cuatro células alcanzando el estadio de blastocisto cuando los oocitos fueron fecundados con espermatozoides X (30,77%) en comparación a cuando la fecundación se realizó con espermatozoides Y (9,68%) y en comparación a cuando se llevó a cabo con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (5,88% y 15,15%, respectivamente) o en el tratamiento control (9,68% y 7,14%, respectivamente). Estos resultados sugieren, que el db-cAMP puede ser un tratamiento efectivo para el semen sexado, a fin de incrementar la producción in vitro de embriones bovinos hembra bajo condiciones químicamente definidas.

Calves born under tropical conditions after direct transfer of cryopreserved in vitro produced embryos

En el presente estudio se comparó el desempeño de 56 novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia directa de embriones producidos in vitro cultivados en un medio suplementado con suero o en uno químicamente definido. No se observaron diferencias en las tasas de aborto (30,43% vs 24,24%), distocias (52,17% vs 51,52%) y parto normal (17,39% vs 24,24%) entre las novillas que recibieron embriones cultivados en el medio suplemento con suero y las que recibieron embriones cultivados en el medio químicamente definido. El sexo de la cría afectó significativamente el porcentaje de distocias, 83,33% para machos y 50% para hembras, (P<0,05). El peso al nacimiento de los becerros tampoco se vio afectado (p>0,05) por la suplementación sérica durante el cultivo (46,86 ± 2,04 kg, para los becerros derivados de los embriones cultivados en el medio suplementado con suero y 46,28 ± 1,42 kg, para los derivados de los embriones cultivados en el medio químicamente definido) ni por el sexo de la cría (machos 47,20 ± 1,50 kg y hembras, 45,45 ± 1,84 kg). El peso de los becerros que nacieron muertos o que murieron luego del nacimiento fue significativamente (P< 0,05) mayor (51,92 ± 1,76 kg) al de los becerros que sobrevivieron (43,88 ± 1,22 kg). La sobrevivencia perinatal no se vió afectada ni la suplementación sérica durante el cultivo embrionario, ni por el sexo de los becerros o el nacimiento de un parto distócico. En conclusión, la presencia de suero en el medio de cultivo no afectó el desempeño de las novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia de embriones producidos in vitro. En este estudio se observó la presencia de becerros con síndrome del recién nacido gigante evidenciado por un alto peso al nacimiento y una alta tasa de abortos y distocias.